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阿维菌素类药物酶联免疫试剂盒质量尺度

 本品系用阿维菌素药物偶联蛋白的抗原、阿维菌素类药物多克隆抗体和酶标识表记标帜羊抗兔及其它试剂制成。用于定量、定性检测牛组织中阿维菌素类药物的残留量。

【物理性状】  试剂盒外不雅观完整,内装试剂齐全。包被抗原的酶联板透明干燥且用真空包装。阿维菌素类药物抗体工作液、底物液、终止液、阿维菌素尺度品溶液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液为透明溶液,酶标识表记标帜物为浅黄色溶液,试剂无菌查验均应合格。

【灵敏度测定】  取已包被好的酶标板12孔,每两孔别离插手0µg/L、0.5µg/L、1.5µg/L、4.5µg/L、13.5µg/L、40.5µg/L尺度溶液各20µL,再插手抗体工作液80µL,用盖板膜盖板,37℃环境中反应30min,取出用洗涤液按每孔250μL,洗板4-5次,每次浸泡10秒,用吸水纸拍干,插手100µL酶标二抗,37℃反应30 min,取出洗板5次,拍干。插手底物液各50µL,避光37℃反应15 min,用50µL终止液终止反应,置450nm波长处测定吸光度值。每一浓度尺度溶液吸光度值(B)平均值除以第一个尺度(0尺度)吸光度值(B0)的平均值再乘以100%,即百分吸光度值。以AVM浓度(µg/L)的自然对数值为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制尺度曲线图。

IC50(即0浓度尺度溶液的吸光度值50%处所对应的AVM浓度)范围应在2.32µg/L ~4.57µg/L之间。

【特异性测定】  取已包被好的酶标板18孔,每两孔别离插手0µg/L、0.5µg/L、1.5µg/L、4.5µg/L、13.5µg/L、40.5µg/L尺度溶液和牛肉样品提取液、20µg/L和50µg/L两个浓度阿维菌素添加的牛肉样本提取液各20µL,再插手抗体工作液80µL,37℃反应30min,取出洗板5次,拍干,插手100µL酶标二抗,37℃反应15 min,取出洗板5次,拍干。插手底物液各50µL,避光37℃反应15 min,用50µL终止液终止反应,置450nm波长处测定吸光度值。每一浓度尺度溶液吸光度值(B)平均值除以第一个尺度(0尺度)吸光度值(B0)的平均值再乘以100%,即百分吸光度值。以AVM浓度(µg/L)的自然对数为X轴,百分吸光度为Y轴,绘制尺度曲线图。从尺度曲线中查出阴性样品和20µg/L和 50µg/L两个浓度阿维菌素添加的组织样品的测定浓度。

阴性样品测定值在3µg/L以下,以20µg/kg 和50µg/kg 两个浓度阿维菌素样本进行添加,回收率应在60.0%~120.0%以上。

【周详度测定】  取已包被好的酶标板32孔,每两孔别离插手0µg/L、0.5µg/L、1.5µg/L、4.5µg/L、13.5µg/L、40.5µg/L尺度溶液20µL,其它20孔插手4.5µg/L的尺度溶液20µL,再插手抗体工作液80µL,37℃反应30min,取出洗板5次,拍干,插手100µL酶标二抗,37℃反应30 min,取出洗板5次,拍干。插手底物液各50µL,避光37℃反应15 min,用50µL终止液终止反应,置450nm波长处测定吸光度值。

20个微孔的4.5µg/L尺度溶液的光吸收值变异系数(%)应≤25%(n=20)

【适用范围】 用于定量、定性检测牛组织(肌肉、肝脏)中阿维菌素类药物的残留量。

【用法和成果判定】

1.  溶液配制

1.1  稀释复溶液:将2X浓缩复溶液摇匀,用水以1:2比例稀释,临用前配制。

1.2  稀释洗涤液:将20X浓缩洗涤液摇匀,用水以1:20比例稀释,临用前配制。

2.  样品前处理

2.1  牛组织(牛肉、牛肝)样本处理方法

2.1.1  取牛组织(肌肉、肝脏)进行均质。

2.1.2  称取2±0.05g样品,插手8mL乙腈,振荡提取20min,3000g以上离心10min,取上清液5mL备用。

2.1.3  取sep-pak vac12cc(2g)柱,称取3g无水硫酸钠平铺在滤板上,插手10mL乙腈溶液。 

2.1.4  插手提取液5mL,收集滤液,待提取液流干,再插手4mL乙腈清洗残留液。

2.1.5  将收集滤液置60℃下氮气吹干,插手1mL稀释了的复溶液复溶。

2.1.6  取20µL进行阐发。

3.  检测程序

3.1 将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20~24℃)平衡30min以上, 留意每种液体试剂使用前均须摇匀。

3.2 取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保留于2-8℃不要冷冻。

3.3 编号:将样品和尺度品对应微孔按序编号,每个样品和尺度品均需做2孔。

3.4 用加样器每孔加尺度品或样本20mL 后,每孔再加80mL抗体溶液。

3.5 用盖板膜盖板后置于37℃环境反应30min。

3.6 小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤液每孔250mL充实洗涤4~5次,每次间隔10~20s,用吸水纸拍干。

3.7 加酶标识表记标帜物:每孔插手100mL。用盖板膜盖板后置37℃环境反应30min,取出重复洗板程序。

3.8 显色:每孔插手底物液A液50mL,再加底物液B液50mL,轻轻振荡混匀37℃环境避光显色15min。

3.9 测定:每孔插手终止液50mL,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测),测定每孔OD值。

4.  成果判定 
B—尺度溶液或样本溶液的平均吸光度值

B0—0µg/L尺度溶液的平均吸光度值

以阿维菌素浓度的自然对数值为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制尺度曲线图。相对应每一个样品的浓度可以从尺度曲线上读出。也可以用回归方程法,计算出样本溶液浓度。操作计算机专业软件,更便于大量样品的快速阐发。

【贮藏条件和保留期】试剂盒应在2~8℃保留,保留期为6个月。

【规格】每个试剂盒含96孔板一块;AVM尺度品6瓶,1mL/瓶(0µg/L、0.5µg/L、1.5µg/L、4.5µg/L、13.5µg/L、40.5µg/L);抗体工作液1瓶,10mL;酶标识表记标帜物工作液1瓶,12mL;20倍浓缩洗涤液1瓶,40mL;2倍浓缩复溶液1瓶,50mL;底物液A液1瓶,7mL;底物液B液1瓶,7mL;终止液1瓶,7mL;高浓度尺度品(1µg/mL)1瓶,1mL;盖板膜1张;自封袋1个;说明书1份;质量陈述1份。

【留意事项】

1、剂盒在缓冲液配制和液体分装上要做到无菌,防止试剂变质。

2、试剂盒尺度品应经过严格配制后方可用于试剂盒中。

3、添加回收用的高浓度尺度品需经过试剂盒自身尺度验证,合格后方可用于特异性和准确度监控用。

4、严格按照质量尺度所述用法和成果判定内容进行试剂盒质量控制。

5、在试剂盒老化尝试中呈现有不合格现象,则视该批试剂盒为不合格。